PN0036 - Painel Aspirante
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Efeito de aplicações sucessivas de terapia fotodinâmica mediada por Curcumina em biofilmes de Candida albicans
Bellini A, Dias LM, Medeiros KS, Klein MI, Pavarina AC
Materiais Odontológicos e Prótese - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARARAQUARA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

A Terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) é um tratamento alternativo com potencial de inativação de Candida ssp. A resistência antifúngica de Candida albicans a fármacos convencionais foi comprovada, porém não há evidências se esse fungo pode ser resistente à aPDT. Este estudo investigou o efeito de aplicações sucessivas de aPDT mediada por Curcumina (CUR) (concentração sub-letal: 40 µg/mL) associada a luz LED (dose sub-letal: 18 J/cm²; 455 nm) no desenvolvimento de resistência, susceptibilidade ou tolerância em C. albicans (ATCC 90028). Biofilmes maduros (48 h) de C. albicans foram cultivados (~7 log₁₀) e submetidos a 10 aplicações sucessivas dos tratamentos (n = 12). Os grupos experimentais foram: aPDT (C+L+), somente CUR (C+L-), somente luz LED (C-L+) e grupo controle do experimento (C-L-). Após os tratamentos, as amostras foram submetidas à diluição seriada e plaqueamento em meio de SDA (Ágar Sabourand Dextrose) sem antifúngico Fluconazol (FLU) e SDA com FLU (sub-MIC: 8 µg/mL). Após 48 h, o número de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) foi determinado. Os dados foram analisados com nível de significância de 5%. Os biofilmes que foram submetidos à aPDT (C+L+) e plaqueados em meio com FLU e sem FLU demonstraram diferença estatística entre a Aplicação 1 e a Aplicação 10, com aumento de viabilidade de 1,39 log₁₀ e 1,38 log₁₀, respectivamente.
Os resultados demonstram uma possível tolerância do fungo à aPDT. Sucessivas aplicações de aPDT mediada por CUR foi capaz de aumentar a viabilidade de C. albicans em modelo de biofilme.
(Apoio: CNPq  N° 52686-2019)

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PN0037 - Painel Aspirante
Área: 3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia

Febre induzida por levedura de cerveja em camundongos: um modelo para estudos de alterações craniofaciais e dentárias
Americano GCA, Rodrigues MDP, Soviero VM, Mengele JO
Odontologia Preventiva e Comunitária - UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

No momento do desenvolvimento craniofacial, a febre pode causar fissuras labiopalatinas e alterações dentárias. Na odontologia, os roedores são muito utilizados para testar hipóteses. Sendo assim, este estudo propôs-se a descrever um protocolo de indução de febre em camundongos usando levedura de cerveja. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Uso Animal da FMP-FASE. Os camundongos fêmeas adultos da linhagem C57Bl/6 foram divididos em dois grupos, sendo 12 no grupo controle e 12 no experimental. Uma dose de 12 ml/ Kg de 15 % w/v de levedura de cerveja foi injetada subcutaneamente em cada camundongo do grupo experimental. Cada camundongo do grupo controle recebeu 12 ml/ Kg de salina (0.9 % NaCl) do mesmo modo. As temperaturas corporais dos animais foram registradas antes do experimento, imediatamente antes das injeções e 3, 6 e 10 horas depois das injeções ao longo de três dias consecutivos, usando um termômetro apropriado. As temperaturas médias antes do experimento entre os grupos controle e experimental não foram diferentes (p = 0.3). A temperatura média do grupo experimental durante o período de febre foi significativamente maior que do grupo controle (p < 0.001).
Portanto, o protocolo sugerido se apresentou como um método efetivo e fácil de reproduzir.
(Apoio: CAPES)

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PN0038 - Painel Aspirante
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Avaliação do efeito fototóxico de diferentes comprimentos de onda de luz LED sobre a expressão gênica de Candida albicans
Sousa TV, Carmello JC, Jordão CC, Dias LM, Pavarina AC
Reabitação Oral - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARARAQUARA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Candida albicans é a espécie mais associada a formas disseminadas de infecção (candidemia) resultando em altos índices de morbidade e mortalidade. O mecanismo de ação da fototerapia baseia-se na produção de espécies reativas de oxigênio, podendo causar danos oxidativos no DNA, o que contribui para a instabilidade genética e possível mutação. Anteriormente, foi observado que a aplicação de LED azul causou danos no DNA de C. albicans. A enzima topoisomerase II (topo II) é essencial para replicação, transcrição, recombinação e condensação cromossômica do DNA, além de reparar possíveis danos causados no DNA. Dessa forma, o presente estudo avaliou a ação da fototerapia mediada por LED nos diferentes comprimentos de onda e doses de luz sobre a expressão gênica da topo II em C. albicans. Suspensões padronizadas de C. albicans foram submetidas aos tratamentos com luz LED: para o LED azul (455 nm): 15 e 50 J/cm ² ; vermelho (660 nm): 5 e 50 J/cm ² ; amarelo (590 nm): 0,1 e 10 J/cm ² e branco (multicromático): 300 lux e 500 lux. Então foi realizada a extração e purificação de RNA, conversão para cDNA e qPCR. Os dados obtidos foram submetidos a ANOVA a um critério fixo, seguido pelo pós-teste de Tukey (p≤0.05) e foram comparados com as células sem tratamento. Os resultados demonstraram que as duas doses de luz azul e luz vermelha diminuíram a expressão de topo II (p≤0.0001). As luzes amarela e branca, promoveram aumento significativo na expressão da enzima.
Podemos concluir que a expressão da enzima Topoisomerase II em C. albicans depende comprimentos de onda da luz LED utilizado para o tratamento.
(Apoio: CNPq  N° 47721  |  FAPESP  N° 2017/02559-6   |  FAPESP  N° 2016/13868-7)

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PN0039 - Painel Aspirante
Área: 3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia

Ação do hipoclorito de sódio 2,5% e da clorexidina 0,12% e 2% sobre a cândida albicans de origem bucal
Bione FTSC, Camelo RS, Melo GTM, Paz ESL, Souza GFM
Pós Graduação - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARARAQUARA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Avaliar a atividade antifúngica do hipoclorito de sódio 2,5%, da clorexidina 0,12% e 2% sobre a Candida albicans bucal. Amostras de voluntários com estomatite protética foram coletadas e transportadas em solução de cloranfenicol 25mg/L. Obteve-se 8 amostras, que foram semeadas em meio Ágar Sabouraud Dextrose (SBD) com cloranfenicol (50mg/L) e incubadas à 28 ± 2°C / 48h. Das que cresceram foram retiradas alíquotas e semeadas em meio CHROMagar Candida e incubadas a 37ºC / 48h para identificação das espécies. Após, alíquotas de C. albicans foram semeadas em meio SBD e depositados discos de papel com clorexidina 2% e 0,12% e hipoclorito Marcas Dragão e Brilux e incubadas por 48h à temperatura ambiente. Seguiu-se a leitura dos halos de inibição em triplicata. Constatou-se crescimento em 87,5% das amostras, sendo verificada a C. albicans em todas. Os quatro produtos testados exibiram atividade antimicrobiana, porém os halos de inibição do hipoclorito 2,5% foram, em média, maiores que os da Clorexidina 0,12% e Clorexidina 2%.
Os produtos testados podem ser utilizados como coadjuvantes no tratamento e controle tópicos da estomatite protética. A Clorexidina 0,12% e Clorexidina 2% podem ser utilizadas para bochecho e o Hipoclorito de sódio 2,5% para higienização das próteses.
(Apoio: CNPq)

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PN0040 - Painel Aspirante
Área: 3 - Cariologia / Tecido Mineralizado

A progressão da lesão de cárie aumenta a atividade da superóxido dismutase e biodisponibilidade de óxido nítrico salivar
Lisboa ACG, Araujo HC, Chaves-Neto AH, Nakamune ACMS, Garcia WG, Oliveira SHP, Pessan JP, Silva CA
Odontologia Preventiva e Restauradora - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARAÇATUBA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

O objetivo do presente estudo foi avaliar alterações no dano oxidativo, atividade de enzimas antioxidantes e biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) salivar em diferentes estágios da cárie. Crianças (1 a 3 anos) de uma creche municipal de Birigui, SP, foram avaliadas e classificadas segundo ICCMS^TM em 4 grupos (n=30/grupo), grupo A (livres de cárie), grupo B (cárie inicial), grupo C (cárie moderada) e grupo D (cárie extensa). A saliva foi coletada após 2 horas de jejum, com uso de Salivete®. Na saliva, foi avaliado o dano oxidativo (DO) pela concentração de proteína carbonilada (PC), usando o método alcalino de DNPH (2,4-Dinitrofenilhidrazina), a atividade enzimática da superóxido dismutase sensível e insensível ao cianeto de potássio (SOD sens KCN e SOD ins KCN, respectivamente) pelo método da auto oxidação do pirogalol, e concentrações de nitrito (metabólito de NO) pelo método de Griess. Os resultados foram comparados entre os grupos (ANOVA, pós teste de Student-Newman-Keuls, p< 0,05). A correlação entre os grupos e as variáveis foram avaliadas por correlação de Spearman. A atividade da SOD sens KCN e a biodisponibilidade do NO foram maiores na saliva de crianças dos grupos C e D e uma redução gradativa nos níveis de PC salivar foi observada nos grupos C e D. Correlação significativa foi observada entre as variáveis e os diferentes grupos (r = -0,7458 para PC, r = 0,6028 para SOD, r = 0,8267 para NO).
Em conclusão, nossos resultados sugerem que a progressão de lesões de cárie aumenta a atividade da SOD sens KCN na saliva, a qual reduz o DO e aumenta a biodisponibilidade do NO salivar.
(Apoio: CAPES  N° Código 001)

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PN0041 - Painel Aspirante
Área: 3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia

Alterações no perfil proteômico da película adquirida do esmalte após bochecho com peptídeo derivado da estaterina
Taira EA, Carvalho G, Ferrari CR, Martini T, Dionizio A, Ventura TMO, Araujo TT, Buzalaf MAR
Estomatologia e Biologia Oral - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - BAURU
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Avaliou-se o perfil proteômico da película adquirida do esmalte (PAE) formada por 3 min ou 2 h após bochecho com peptídeo derivado da estaterina contendo 15 aminoácidos (região aminoterminal), com serinas 2 e 3 fosforiladas (Stat). Nove voluntários participaram em 2 dias consecutivos, nos quais, após profilaxia, bochecharam por 1 min 10 mL de tampão fosfato contendo Stat (1,88x10-5 M) ou tampão fosfato apenas (controle). A PAE foi formada sobre o esmalte por 3 min ou 2 h e coletada com papel filtro umedecido em ácido cítrico 3%. Após extração proteica, procedeu-se à análise proteômica quantitativa livre de marcadores. Em 3 min, 19 e 131 proteínas foram identificadas unicamente nos grupos tratado com Stat e controle, respectivamente, sendo proteínas típicas da PAE apenas encontradas no último. Apenas 2 proteínas (neutrófilo defensinas) foram aumentadas mediante tratamento com Stat, enquanto 65 foram diminuídas (várias típicas da PAE). Após 2 h, 50 e 109 proteínas foram identificadas exclusivamente nos tratamentos Stat e controle, respectivamente. Subunidades de hemoglobina e queratina foram apenas encontradas no grupo Stat, enquanto que cistatina C, catepsinas D e G, isoformas de heat shock 70 e protocaderina foram exclusivas do controle. 22 proteínas tiveram aumento de expressão com Stat, como histatina 1, albumina sérica e isoformas de neutrófilo defensinas e queratina. Entretanto, 77 proteínas foram diminuídas, a maioria típicas da PAE.
Em ambos os períodos avaliados, o tratamento com Stat alterou profundamente o perfil proteômico da PAE.
(Apoio: CAPES)

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PN0042 - Painel Aspirante
Área: 3 - Cariologia / Tecido Mineralizado

Fluoreto solúvel em HCl 0,01 N como indicador da biodisponibilidade sistêmica de fluoreto de dentifrícios à base de Na₂FPO₃/CaCO₃
Rocha-Gaspar DRC, Ricomini-Filho AP, Cury JA
Odontologia - FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Nós hipotetizamos que o fluoreto solúvel (FST=FPO₃^2-+F^-) em HCl 0,01 N, e não o FT (FT=FST+F_ins), de dentifrício à base de Na₂FPO₃/CaCO₃ seria um indicador da biodisponibilidade sistêmica ao fluoreto (F). Foi conduzido um estudo in vivo, cruzado em 4 fases, nas quais 10 voluntários foram submetidos sequencialmente a quatro grupos de tratamento com o dentifrício Sorriso Dentes Brancos® (Na₂FPO₃/CaCO₃ 1450 μg F de FT/g) fresco e envelhecido. Grupo I-Dentifrício fresco (1332,5 μg FST/g), grupo II ao IV: dentifrício envelhecido tendo 1113,5; 796,6 e 684,3 μg de FST/g, respectivamente. Antes e por 180 min após a ingestão, amostras de sangue e saliva foram coletadas para determinação da concentração de F. Urina de 24 h do dia anterior (baseline) e do dia do experimento também foram coletadas para análise de F excretado. A concentração de F no plasma, saliva e urina foi determinada com EIE para F. A concentração de FT e FST dos dentifrícios foi determinada pelo protocolo de Cury et al. com as amostras preparadas em HCl 0,01 N e água. A área sob a curva da concentração de F no plasma e na saliva vs o tempo (ASC=ngF/mlxmin) e a concentração máxima de F no plasma (C_Max) foram calculadas. A quantidade de F excretada (mg F) foi calculada por subtração. Os dados foram analisados por correlação (p<0.05). Foi encontrada uma correlação significativa entre o FST ingerido e a ASC de F no plasma, C_Max, ASC de F na saliva e F excretado (r=0,68 p<0,0001; r=0,72 p<0,0001; r=0,47 p=0,0185; r=0,62 p<0,0001, respectivamente), mas não para o FT ingerido (p>0,05).
Os resultados dão sustentação à hipótese formulada.
(Apoio: CNPq  N° 435955/2018-7  |  CAPES  N° 001)

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PN0043 - Painel Aspirante
Área: 3 - Cariologia / Tecido Mineralizado

Dentifrícios fluoretados comercializados para crianças no Brasil e México
Leite-Filho AM, Valdivia-Tapia AC, Costa RCNP, Miranda LFB, Espinoza EV, Cury JA
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - RIBEIRÃO PRETO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Dentifrícios encontrados no México são produzidos por multinacionais, mas, no Brasil também são por fabricantes locais. O objetivo foi comparar a composição (sal fluoretado / abrasivo) de dentifrícios infantis comercializados no Brasil e no México, e avaliar a concentração (ppm F; mg F / kg) do fluoreto potencialmente biodisponível para possuir benefício anticárie (fluoreto solúvel total, FST). Vinte e quatro marcas foram encontradas no Brasil, e de acordo com o fabricante: 19 formuladas com NaF / SiO₂ (16 com 1100, uma com 1000, uma com 995 e outra com 500 ppm F); 3 com Na₂FPO₃ / CaCO₃ (900, 1100 e 1179 ppm F) e duas com Na₂FPO₃ / SiO₂ (um com 1000 e outro com 1100 ppm F). No México, foram encontradas seis marcas, todas formuladas com NaF / SiO₂ (uma com 995, uma com 1085, três com 1100 e uma com 1450 ppm F). De cada marca foram adquiridos 2-3 tubos, analisados em duplicata seguindo protocolo validado (Cury et al., 2010). O fluoreto foi determinado com eletrodo íon específico por técnica direta, e os resultados expressos em ppm F (mg F / kg). As concentrações de fluoreto total (FT) foram próximas às declaradas pelos fabricantes do Brasil e México. O FST, foi próximo ao FT em dentifrícios com SiO₂ como abrasivo, vendidos em ambos países. Dentifrícios com CaCO₃ como abrasivo foram encontrados apenas no Brasil, e cerca de 21% do fluoreto total destas formulações apresentava-se insolúvel.
Conclui-se que dentifrícios infantis vendidos no Brasil e no México são diferentes, em termos de marcas, composição ou concentração de fluoreto e biodisponibilidade (FST) para eficácia no controle de cárie.
(Apoio: CAPES  N° 88887.341996-00  |  CAPES  N° 88882.445799/2019-01  |  CNPq  N° 131732/2019-6)

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PN0044 - Painel Aspirante
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Terpineol induz menor metabolismo celular de biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans
Martorano-Fernandes L, Lacerda MC, Borges-Grisi MHS, Almeida LFD
Faculdade de Odontologia de Piracicaba - FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Avaliou-se o metabolismo celular de biofilmes uni-espécie de Candida albicans e Streptococcus mutans, e biofilmes duo-espécie expostos ao fitoconstituinte alfa-terpineol. Foram desenvolvidos biofilmes nas concentrações celulares de 1x10⁶ UFC/mL para C. albicans (ATCC 90028) e 1x10⁸ UFC/mL para S. mutans (UA 159) (37ºC em microaerofilia). Uma solução de alfa-terpineol foi utilizada nas concentrações de 80 mg/ mL (Terp 80) e 60 mg/ mL (Terp 60). Clorexidina 1% (CHX) e NaCl 0,9% foram utilizados como controles negativo e positivo, respectivamente. O tratamento foi realizado 24, 72 e 96 horas após a adesão celular e amostras dos biofilmes foram coletadas para análise 24h após a exposição às substâncias. Avaliou-se o metabolismo celular dos biofilmes por meio do ensaio de MTT (n=8/grupo). Os dados foram analisados por Mann Whitney (α = 5%). Quando expostos a Terp 80, Terp 60 e CHX, o metabolismo celular de biofilmes uni-espécie de S. mutans foi menor ao de biofilmes uni-espécie de C. abicans e duo-espécie em todos os tempos de avaliação (p < 0,05). Biofilmes que foram desenvolvidos por 24h e tratados com Terp 80, Terp 60 e CHX obtiveram menor metabolismo celular quando comparado ao controle positivo (p < 0,05). Similarmente, biofilmes de 72h e 96h expostos as duas concentrações de alfa-terpineol também obtiveram menor metabolismo celular em relação ao NaCl 0,9% (p < 0,05), entretanto, não diferiram da CHX.
As soluções de alfa-terpineol nas concentrações de 80 mg/ mL e 60 mg/ mL diminuíram o metabolismo celular de biofilmes uni-espécie e duo-espécie de C. albicans e S. mutans.
(Apoio: CAPES  N° 001)

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PN0045 - Painel Aspirante
Área: 3 - Cariologia / Tecido Mineralizado

Efeito do pH na reatividade do fluoreto com esmalte e dentina hígidos e desmineralizados
Ferreira RS, Valdivia-Tapia AC, Soares-Yoshikawa AL, Leite-Filho AM, Tabchoury CPM, Cury JA
Biociências - FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Fluoreto total (FT) formado no esmalte/dentina pode ser usado como indicador do potencial anticárie da aplicação profissional de F (ATF) ao invés de CaF₂, mas isso não foi explorado. Assim, FT, CaF₂ e FAp formados em blocos de esmalte (E) e dentina (D) bovinos, hígidos (H) e desmineralizados (C) foram avaliados. Blocos de EH, EC, DH e DC (n=16/grupo) foram randomizados para soluções fluoretadas neutra ou acidulada (FFA) com 10000 μg F/mL. Blocos foram divididos ao meio; 16 hemiblocos submetidos aos tratamentos, por 4 min, e outros 16 como controle. FT foi determinado em 8 hemiblocos controle e 8 tratados, e CaF₂ e FAp nos outros 8 hemiblocos. Para determinação do FT, os hemiblocos foram submetidos a 6 extrações consecutivas em HCl 0,5 M e subsequente adição de TISAB II com NaOH. Os hemiblocos foram imersos em KOH 1 M por 24 h para extração de CaF₂, seguido de adição de TISAB II em HCl 1 M. Em seguida, FAp foi extraída como descrito para FT. F formado foi determinado em eletrodo íon-específico. Os resultados encontrados para os hemiblocos controle foram subtraídos dos tratamentos e expressos em µg F/cm² (CaF₂) e µg F/cm³ (FT e FAp). Dados foram analisados por ANOVA 2 fatores e teste de Tukey (α=5%). F reagiu até 30 μm da superfície dos substratos. Maiores valores de FT, CaF₂ e FAp foram observados na DC tratada com FFA (0,71±0,34, 493,5±318,9 e 0,10±0,06; p<0,05). Correlação linear positiva foi observada entre FT e CaF₂ apenas para DH (r=0,711, p=0,002) e DC (r=0,815, p<0,01).
Concluiu-se que análise de FT é capaz de diferenciar tanto profundidade da reação como reatividade de produtos para ATF.
(Apoio: CNPq  N° 141407/2018-2  |  CAPES  N° 001)

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